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多肽的溶解

发表时间:2018-11-29 00:00
多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成。
       虽然疏水肽链二级结构的形成更明显,但除了最短的肽链外,该现象发生在几乎所有肽链,与极性无关。因此,溶解多肽的**个原则是用无菌的蒸馏水或去离子水(如果条件允许则用无氧水)。
        多肽溶液可能遇到细菌降解。为避免该现象的发生,多肽应溶解在无菌的蒸馏水中,或者用0.45或0.2μm孔径的滤膜过滤除菌。包含Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化,因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到。
        若多肽不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意:超声处理会引起溶液发热和多肽降解。
         若多肽中包含多个碱性氨基酸,使用1~10%的乙酸水溶液;对于疏水性非常强的多肽,则使用50%乙酸。
       若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用1~10%氨溶液或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。pH值在层析前必须调整。
       若肽要上柱,有机溶剂的量则必须很少,否则将严重影响滞留时间。
       若多肽因为含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烃侧链而高度疏水,或为中性肽时,DMF或DMSO等膜变性剂的使用,有助于多肽的溶解。
    a. 高浓度膜变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶。
    b. 膜变性剂适于多肽分析液的制备,但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰。
    c . DMF是**变性剂(最高浓度可达30%),滴加至多肽溶解。

    d. 反相层析时,DMF将与洗脱液前峰一起流出,依进样量的多少,峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF流出后几分钟内流出,若肽链很小,洗脱太早,多肽的量将降低。

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